動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是當(dāng)今生物工程領(lǐng)域中的前沿技術(shù)之一,無(wú)論是在研究還是在生產(chǎn)實(shí)踐方面都對(duì)當(dāng)代生物技術(shù)有著重要的影響。近年來(lái)隨著臨床需求的增加,單克隆抗體藥物發(fā)展迅速,如何提高哺乳動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)治療性抗體的產(chǎn)量和質(zhì)量越來(lái)越受到重視。
細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬動(dòng)物細(xì)胞的體內(nèi)生長(zhǎng)環(huán)境,維持體外細(xì)胞存活和增殖的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)基礎(chǔ),其主要功能是為細(xì)胞提供適宜的pH和滲透壓,以及細(xì)胞本身不能合成的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
培養(yǎng)基的主要作用是促進(jìn)和維持細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育,其開發(fā)策略可以分為兩類:自上而下和自下而上。自下而上的策略指的是,對(duì)培養(yǎng)基中各種單一營(yíng)養(yǎng)成分的不同濃度造成其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和對(duì)產(chǎn)物產(chǎn)生的不同影響進(jìn)行考察。該策略需要耗費(fèi)大量的時(shí)間進(jìn)行大量的試驗(yàn),進(jìn)而著重考察的是每一個(gè)組分對(duì)細(xì)胞的影響。而自上而下的策略指的是將培養(yǎng)基分成許多個(gè)不同的亞型,針對(duì)各個(gè)亞型先進(jìn)行篩選和組合,而后再進(jìn)行組內(nèi)的優(yōu)化。
細(xì)胞培養(yǎng)基必須含有充分的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),才能滿足新細(xì)胞合成、細(xì)胞代謝等生化反應(yīng)所需要的物質(zhì)和能量。其主要成份是水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽和其它一些輔助營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等。此外,還可能含有血清、血清替代成分、pH指示劑等。
通常液體細(xì)胞培養(yǎng)基避免-20℃凍存,因?yàn)榻鈨鰰r(shí)可能會(huì)有營(yíng)養(yǎng)成份析出,影響培養(yǎng)效果。正常情況下于2~8℃避光保存,使用前從冰箱取出,放入室溫進(jìn)行平衡。通常的液體培養(yǎng)基有效期是6個(gè)月到12個(gè)月。盡量避免長(zhǎng)期貯存,其中的谷氨酰胺會(huì)隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)而慢慢分解,如果細(xì)胞生長(zhǎng)不良,可考慮檢測(cè)培養(yǎng)基中的谷氨酰胺含量確定是否再補(bǔ)加谷氨酰胺。