禽呼腸孤抗體檢測-elisa酶聯(lián)免疫試劑盒使用說明書

【用途】

用來檢測雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體

【試驗原理】

禽呼腸孤病毒被認(rèn)為與病毒性關(guān)節(jié)炎、發(fā)育遲緩綜合征、呼吸系統(tǒng)疾病、腸熱病、吸收障礙綜合癥和骨質(zhì)疏松有關(guān)，從未發(fā)病的雞中也可分離到呼腸孤病毒，根據(jù)宿主日齡、毒力和接觸病毒途徑的不同，病毒誘發(fā)疾病的的性質(zhì)、癥狀和嚴(yán)重程度也不同，雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體水平及整個雞群的免疫狀況可用方法進行監(jiān)測。

將滅活的抗原包被在微孔板上，加入稀釋后的血清并孵育。血清中的所有抗REO抗體將與微孔板上的REO抗原結(jié)合并形成REO抗原抗體復(fù)合物，然后洗掉未結(jié)合的物質(zhì)，加入堿性磷酸酶標(biāo)記的抗雞的（結(jié)合物）至微孔板中，結(jié)合物將與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，孵育后洗掉未結(jié)合的結(jié)合物，加入底物溶液。底物與堿性磷酸酶發(fā)生反應(yīng)形成黃色的物質(zhì)。后，終止反應(yīng)，將顏色固定。顏色的深淺可用酶標(biāo)儀（405-410nm）測定。

【主要組成成份】

【儲存條件及有效期】

1.2~8℃避光保存，防止冷凍，有效期為12個月。

2.包被板開封后2~8℃避光保存，使用期限為15天。

【適用儀器】

含450nm和630nm波長酶標(biāo)儀；37℃恒溫設(shè)備；可調(diào)微量移液器。

【樣本要求】

1. 為取得實驗效果，避免使用含疊氮鈉、高血脂、長菌以及嚴(yán)重溶血的樣品；

2.短期（7天）將進行檢測的血清樣品可存放于2～8℃；如需長期保存，應(yīng)置于-20℃或以下，避免反復(fù)凍融。

【檢驗方法】

1. 洗滌液配制：用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2號液）按1：10稀釋（如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水），充分混勻即為工作洗滌液。

2.樣本稀釋：用樣本稀釋液（5號液）將待檢血清按1:100稀釋（如5μl血清＋495μl樣本稀釋液），充分混勻。 陰性、陽性對照品不用稀釋，直接加樣。

3.加樣反應(yīng)：每次試驗設(shè)陰性對照2孔、陽性及空白對照各1孔（分別加入陰性、陽性對照及樣本稀釋液100μl）。樣本檢測孔每孔加已稀釋血清樣本100μl。37℃避光反應(yīng)30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作濃度洗滌液洗滌3次，每次均需停留1分鐘；后一次甩凈，拍干。

4.加酶反應(yīng)：除空白對照孔外，其余每孔加酶結(jié)合物（1號液）1滴，37℃避光反應(yīng)30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。

5.顯色反應(yīng)：加底物（3號液）和顯色劑（4號液）各1滴，混勻，37℃下避光顯色10分鐘。

6.終止反應(yīng)： 加終止液（6號液）1滴，以空白對照調(diào)零，用酶標(biāo)儀于450nm波長（630nm作為參比波長）讀取OD值。

【參考值】

1.Cut-off 值 (COV)=陰性對照平均OD值×2.1 (陰性對照孔OD值＜0.08時按0.08計)。

2.有效性判定：

空白對照孔OD值＜0.05（若大于0.05則實驗無效）；

陰性對照孔OD值≤0.10（若大于0.10則實驗無效）；

陽性對照孔OD值≥0.30（若小于0.30則實驗無效）。

【檢驗結(jié)果的解釋】

樣本OD值≥COV值時，判為病毒抗體陽性；

樣本OD值＜COV值時，判為病毒抗體陰性。                        

【檢驗方法的局限性】本試劑僅適用于檢測鴨血清。

【禽呼腸孤抗體檢測-elisa酶聯(lián)免疫試劑盒注意事項】

1.包被板須密封防潮。從冷藏環(huán)境中取出時，應(yīng)平衡至室溫后，方可開封啟用。未使用完的板條應(yīng)即時放回有干燥劑的自封袋中，4℃密封保存。

2.滴加試劑前應(yīng)將滴瓶輕搖、混勻，首滴棄去；滴加試劑時瓶身應(yīng)保持豎直。

3.瓶蓋每次使用后要蓋緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號試劑盒的試劑組份不可混用。

4.孵育時，推薦使用水浴箱。如無水浴箱，可取密封濕盒放入37℃溫箱內(nèi)使用。

5.用棄的試劑盒及樣本都應(yīng)按污染物妥善處理。試劑盒內(nèi)終止液有腐蝕性，須小心使用。