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產(chǎn)品介紹

呼吸道合胞病毒抗原快速檢測卡（膠體金法）?

用途

用于定性檢測有癥狀病人鼻沖洗液或鼻咽拭子標本中的呼吸道合胞病毒（RSV）融合蛋白抗原的免疫層析試驗。該試驗旨在用于新生兒或5歲以下兒童呼吸道合胞病毒感染的體外診斷。建議陰性結(jié)果做細胞培養(yǎng)進一步證實。

摘要和解釋

RSV是上呼吸道和下呼吸道感染的常見原因，也是嬰幼兒患細支氣管炎和肺炎的主要原因。RSV在每年的秋天、冬天和春天有規(guī)律的發(fā)生，出現(xiàn)感染和暴發(fā)。雖然RSV在較大兒童和成人可引起顯著的呼吸道疾病，但比嬰幼兒緩和的多。為了獲得有效的抗菌治療，RSV的快速鑒定診斷就顯得特別重要?？焖勹b定可以減少住院時間，減少抗菌素的使用，減少住院治療費。

呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）提供了一種簡便快速檢測鼻洗液和鼻咽拭子標本中的 RSV的方法。由于它的簡便快速性，有助于做出治療和住院的決定。

測試原理

     呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）是一種用鼻洗液和鼻咽拭子標本檢測RSV融合蛋白抗原的免疫層析膜試驗?？筊SV抗體，樣本線，吸附到硝酸纖維素膜上，對照抗體作為第二條線吸附到同一膜上?？筊SV和對照抗體結(jié)合到可視粒子上，這種粒子干燥結(jié)合到惰性纖維支持物上。形成的結(jié)合物墊和有條紋的膜結(jié)合形成檢測條。檢測條置于一個硬紙盒的右邊，這個硬紙盒是一個書形的絞鏈的檢測裝置。拭子標本（對照和病人的）需要一個預備步驟，鼻洗液標本不需要預備。執(zhí)行試驗時，測試樣本加到檢測條的頂部的白墊上，閉合檢測裝置。標本中的存在的RSV抗原與抗RSV抗體結(jié)合物結(jié)合，形成的抗原結(jié)合物復合物被固定的抗RSV抗體捕獲，形成樣本線。固定的對照線抗體捕獲一個可視的結(jié)合物，形成一條粉紅色的對照線。對照線在未檢測的裝置中是藍色的。試驗結(jié)果用可視的檢測的粉紅色到紫色線的存在與否來解釋。陽性結(jié)果，在15分鐘讀數(shù)時，會出現(xiàn)一條樣本線和一條對照線。陰性結(jié)果，在15分鐘讀數(shù)時，只出現(xiàn)一條對照線，表明樣本中未檢測到RSV抗原。對照線未出現(xiàn)，或仍為藍色，表示無論樣本線出現(xiàn)與否，測試無效。

試劑和材料

提供的材料

檢測卡：包被有鼠抗RSV抗原特異抗體和對照線抗體的膜與鼠抗RSV抗體結(jié)合物和對照線抗體結(jié)合物結(jié)合在一個折合式檢測卡上。未檢測的膜在對照線區(qū)域有一條藍色線。

移液管：固定體積（100μl）的移液管用于將樣本轉(zhuǎn)移到檢測裝置中。只能用Binax提供或能轉(zhuǎn)移100μl樣本體積的校正管。

陽性對照拭子：滅活的RSV干燥結(jié)合到拭子上。

陰性對照拭子；滅活的A群鏈球菌干燥結(jié)合到拭子上。

對照拭子用的瓶裝洗脫液：盛有一定體積（0.5ml）洗脫液，用于洗脫對照拭子。不要使用其他洗脫液。

未提供的材料

時鐘、秒表或跑表；鼻洗液收集容器，鼻咽拭子，運輸媒介。

可選物品

鼻咽（NP）拭子標本附件包：

鼻咽拭子：用于呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）的無菌泡沫拭子。

用于拭子標本的洗脫液小瓶：

瓶中盛有一定體積的洗脫液（0.5 ml），用于處理要測試的拭子標本。

注意事項

1．  體外診斷用。

2．  使用前要將檢測裝置密封在錫箔中。

3．  不要使用過期的試劑盒。

4．  不要將不同批號試劑盒的試劑混合使用。

5．  檢測條頂部的白色樣本墊盛有從病毒中提取靶抗原的試劑，為了保證Z佳操作，加樣時將標本慢慢加到墊的中央，以使所有樣本都吸附到墊上。

6．  RSV陽性對照拭子是用滅活的RSV感染組織培養(yǎng)細胞準備的，隨后用生物測定程序進行了測試。測定時要遵守一切注意事項。樣本可能有感染性，應當根據(jù)地方、州和聯(lián)邦的法規(guī)建立處理和處置措施。

7．  檢測中加入的試劑不足時會出現(xiàn)無效結(jié)果。為確保加入足夠量的體積，在將吸管中的內(nèi)容物加到樣本墊上時，要確定移液管的下部是充盈的、沒有氣泡產(chǎn)生。如果有空氣存在，通過擠壓上部的吸球，將標本排回到容器中，重新吸入標本。必要時，換一個新吸管。

8．  測試鼻洗液標本時，吸樣本時要避開粘液部分。如果吸管堵塞，致使下部柄部不充盈，通過擠壓上部的吸球把標本排回到容器中，重吸樣本，必要時換一個新吸管。

9．  聚酯、人造纖維、泡沫和棉花鼻咽拭子都有易彎曲的柄，評估發(fā)現(xiàn)這些都可用于呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）。不要用藻酸鈣鼻咽拭子。

10．  所有移液管和洗脫瓶都是單次使用的，不要用于多個樣本。

貯存和穩(wěn)定性

試劑盒在室溫（59-86℉，15-30℃）保存，呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）在失效期前是穩(wěn)定的。失效期標注在外包裝和盒內(nèi)。

標本采集和處理

為了取得Z佳結(jié)果，請使用新鮮鼻咽拭子或鼻洗液標本。

鼻咽拭子：

聚酯、人造纖維、泡沫和棉花鼻咽拭子都有易彎曲的柄，評估發(fā)現(xiàn)這些都可用于本試劑盒。將收集后的拭子標本在1小時內(nèi)加入到0.5~3.0ml的適宜的液體轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中。如果不能立即測定，洗脫液拭子標本可在室溫保存4小時，或2-8℃保存48小時。測試前將標本平衡至室溫，并輕輕旋動。

鼻洗液：

用與病人年齡相稱的操作，在標準采樣杯中收集洗液標本。如果不能立即測定，洗液可在室溫保存4小時，或2-8℃保存48小時。測試前將標本平衡至室溫，并輕輕旋動。洗液標本可在測試前加入到3.0ml的適宜的液體轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中。轉(zhuǎn)移介質(zhì)可導致洗液稀釋，這種稀釋可能像操作部分報道的那樣降低試驗敏感性。

轉(zhuǎn)移介質(zhì)：

下列轉(zhuǎn)移介質(zhì)受過測試，適用于本試劑盒。

Amies介質(zhì)

Binax洗脫液

Hank,s鹽平衡液

M4介質(zhì)

M4RT介質(zhì)

M5介質(zhì)

鹽水

Stuart,s介質(zhì)

質(zhì)量控制

日常質(zhì)量控制：

呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）內(nèi)嵌有操作對照。作為日常質(zhì)量控制，Binax建議每次試驗都要記錄這些對照結(jié)果。

操作對照

A．未檢測裝置在對照位置有一根藍色線。如果進行試驗試劑起作用了，檢測裝置中的這根藍色線將變?yōu)榉奂t色。

B． 結(jié)果窗口中清晰的背景顏色是陰性背景對照，15分鐘內(nèi)窗口背景顏色會從粉紅色到白色。背景顏色不應干擾測試。

外部陰陽性對照：

建議用陰陽性對照確保：

l  所用試劑有效

l  試驗操作正確

呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）內(nèi)裝有陰陽性對照拭子。這些拭子將監(jiān)控試劑故障。陽性對照確保測定準確。每打開一個新試劑盒都要測試這些拭子，其他對照遵照下列要求做：

l  地方、州和/或聯(lián)邦法規(guī)

l  遵照集團和/或本試驗室的標準質(zhì)量控制程序

為了正確指導質(zhì)量控制操作，請參閱NCCLS EP12A和42CFR493.1202(C)（僅限美國用戶）。

如果未得到正確的質(zhì)控結(jié)果，請不要報告病人結(jié)果，在工作時間聯(lián)系Binax技術(shù)部（EST）。

樣本準備步驟

鼻洗液：

鼻洗液樣本不需要預備，直接進入測定程序。

鼻咽拭子：

在0.5-3.0ml的液體轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中轉(zhuǎn)動洗脫拭子，進入測試程序。注意：如果在Binax洗脫液中洗脫拭子，按照下列程序預備對照拭子。

對照拭子：

1．  試劑盒內(nèi)盛有裝滿洗脫液的小瓶，將瓶蓋開啟。

2．  將欲測試拭子放入瓶中，將拭子在液體中轉(zhuǎn)動3圈。

3．  將拭子按在瓶壁上轉(zhuǎn)動，使樣本從拭子中移出。

4．  扔掉拭子。

5．  盡早檢測液體樣本，進入檢測程序。

測試程序

1．  測試前將裝置從錫箔中取出平放在工作臺上。

2．  將移液頭插入液體樣本中，擠壓上部吸球吸液。當吸液頭部注滿液體后松開吸球，這將會把液體吸入移液管中。移液管下部不要產(chǎn)生空氣。

3．  看檢測裝置上的箭頭找到白色樣本墊，通過擠壓上部吸球，慢慢將移液管中液體全部（100μl）加入到樣本墊的中部。

4．  立即從檢測裝置中揭去粘附襯，合上并密封裝置，15分鐘時讀窗口中的結(jié)果。早于或晚于15分鐘結(jié)果可能不準確。

注意：讀結(jié)果時，如有必要，將裝置傾斜以減少眩光。

結(jié)果解釋

對陰性標本，窗口底部的藍色對照線變紫紅色，無其他線出現(xiàn)。

對陽性標本，藍色對照線變紫紅色，上部的樣本線也變紫紅色。

如果對照線仍為藍色或根本沒有出現(xiàn)，試驗結(jié)果無效。

對無效試驗，用一新的檢測裝置重做。如果問題沒有解決，電告Binax技術(shù)部。

結(jié)果報告

建議報告結(jié)果

陽性

RSV抗原陽性?；畈《敬嬖跁r可能出現(xiàn)陽性結(jié)果。

陰性

RSV抗原陰性。由于RSV不能被排除的感染，樣本中的抗原可能在檢出限以下。Binax建議對陰性樣本做培養(yǎng)。

局限性

呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）檢測活的和死的RSV。測試結(jié)果與標本中的抗原量有關(guān)，可能與用同一標本做細胞培養(yǎng)所得結(jié)果不*。

標本采集量不足或病毒排出水平低可能出現(xiàn)差一點的結(jié)果，甚至可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

陰性結(jié)果不能排除RSV感染，也不能排除造成呼吸道感染的其他病毒的感染。因此，所得結(jié)果要結(jié)合臨床結(jié)果作出準確診斷。Binax測試結(jié)果在用palivizumab治療的病人中還沒進行評估。

然而一項分析研究表明palivizumab干擾呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）檢測RSV的能力。

抗菌素和干擾素的干擾潛力還未確定。

單克隆抗體可能不能檢測所有抗原變異株或新株RSV。

預期值

RSV的流行年年不同，在秋、冬季暴發(fā)。RSV的陽性檢出率受許多因素影響，包括標本采集方法，所用試驗方法，地理位置，特定區(qū)域的流行。2002年Binax臨床研究中，在洗液標本中RSV的平均流行是2%，咽拭子標本中是4%。2003年收集的鼻咽拭子標本中RSV的流行是21%。

性能數(shù)據(jù)

分析研究

分析反應性

已知2個亞群的RSV，每個亞群都保留有呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）作為靶位的融合蛋白2。

6株A亞群分離菌和5株B亞群分離菌用呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）測試為陽性，測試的濃度范圍為1.56×101TCID50/ml到5.00×104TCID/ml。

注意：已報道的TCID50/ml水平是由一系列因素決定的，包括：使用的細胞培養(yǎng)系，傳代數(shù)目，各種分離菌的數(shù)目。

分析特異性（交叉反應性）

為了測定呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）的分析特異性，測試了48株可能共棲存在在鼻腔或鼻咽部的病原微生物（28株細菌，20株病毒）。所有下列微生物在濃度大于1×105TCID50/ml（病毒）或大于1×108/ml（細菌）時，結(jié)果是陰性的。肺間質(zhì)病毒在2×103TCID50/ml測定沒有交叉反應性。

這些病毒株是從美國收集獲得的(ATCC)，帶有滴度信息，但滴度沒被Binax驗證。

干擾物質(zhì)；

下列物質(zhì)，自然存在于呼吸道標本或由人工導入鼻腔或鼻咽部，經(jīng)測評，在下列濃度未發(fā)現(xiàn)對呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）造成影響。

臨床研究

鼻洗液—臨床特異性（前瞻性研究）：

2002年流感期間，在遍及全美的醫(yī)生辦公室和診所對呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）結(jié)果和細胞培養(yǎng)結(jié)果進行了多中心比較研究。鼻洗液標本是從呈現(xiàn)RSV樣癥狀3天左右的兒童或成人采得，并且用呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）進行了評價。試驗人群女性約占46%，男性約占54%。該研究中的病人不包括從登記之日起6個月內(nèi)接種過流感疫苗的病人，也不包括30日內(nèi)服用過流感或RSV藥物的病人。沒有無效結(jié)果被報道。191份鼻洗液標本分4組測試。呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）總特異性是98%，總測試*性是98%，95%可信區(qū)間如下所示。

鼻洗液培養(yǎng)基    

                  +      －

NOW eq oac(○,R)R   +

結(jié)果     －

95%CI特異性=98%（184/187）（95.4%  99.4%）總*性=98%(187/191)(94.7%  99.1%)

呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）在4個測試點相似操作，如下表所示

鼻洗液—臨床敏感性和特異性（回顧性研究）：

自從在前瞻性研究中少量陽性培養(yǎng)基證實有RSV感染產(chǎn)生以來，進行了一次回顧性研究，如下所示。用呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）對47份RSV培養(yǎng)陽性標本和12份RSV培養(yǎng)陰性標本的鼻洗液進行了評估。所有標本均來自一所大學醫(yī)學中心，所有病人都住在美國東北部。試驗人群男性占約49%，女性約占51%。呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）敏感性是89%，然而試驗特異性是100%，總試驗*性是92%，95%可信區(qū)間如下所示。

培養(yǎng)

               +      －

NOW eq oac(○,R)R   +

結(jié)果     －

敏感性=89%（42/47）（77.3%-95.3%）

特異性=100%（12/12）（75.3%- 99.8%）

總*性=92%(54/59)(81.6%- 96.2)

鼻咽拭子敏感性和特異性(前瞻性研究)：

在2002年和2003年流感季節(jié)，在美國一家研究中心對呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）結(jié)果與細菌培養(yǎng)結(jié)果進行了比較研究。鼻咽拭子標本取自有RSV或流感癥狀的兒童。在用呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）評價前所有拭子標本都放入0.5-3ml的轉(zhuǎn)移介質(zhì)中。試驗人群中女性占43%，男性占57%。測試了179份鼻咽拭子標本，全為有效標本。呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）的試驗敏感性、特異性和總*性與培養(yǎng)/FDA比較是93%。95%可信區(qū)間如下所示。

培養(yǎng)/DFA

              +      －

NOW eq oac(○,R)R   +

結(jié)果     －

敏感性=93%（25/27）（76.5%-97.7%）

特異性=93%（142/152）（88.3%- 96.4%）

總*性=93%(167/179)(88.6%- 96.1)

呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）在所有試驗點相似操作，如下表所示。

重復性研究：

在3個獨立的地點將包括陰性、弱陽性、陽性的標本編碼分組，利用呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）進行單盲研究。參與者在3天內(nèi)對每一標本進行多次測試。234份標本100%得到預期結(jié)果，95%可信區(qū)間為98.4-100%。

參考文獻

1）  Williams, KM, Jackon MA, Hamiliton M. Rapid Diagnostic Testing for URIs in Children: Impact on Physician Decision Making and Cost. Infect. Med. 19(3): 109-111, 2002.

2）  Lopez, Juan A., R. Bustos, C. Orvell, M. Berois, J. Arbiza, B. Garcia-Barreno, J.Melero. Antigenic Structure of Human Respiratory Syncytial Virus Fusion Glycoprotein. Jr. of Virology, vol. 72, no.8, August 1998, pp.6922-6928.

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