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產(chǎn)品名稱:

黃曲霉B1檢測試劑盒(ELISA方法)

產(chǎn)品型號: 產(chǎn)品時間: 2023-03-08
黃曲霉B1檢測試劑盒(ELISA方法)采用間接競爭ELISA方法檢測谷物、飼料等樣品中的黃曲霉B1,試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的黃曲霉B1和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗黃曲霉B1抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含黃曲霉B1含量成負(fù)相關(guān)。

產(chǎn)品概述

黃曲霉B1檢測試劑盒(ELISA方法)

使用說明書

(酶聯(lián)免疫法)

 

 1 原理及用途

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測谷物、飼料等樣品中的黃曲霉B1(Aflatoxin B1,AFB1),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的黃曲霉B1和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗黃曲霉B1抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含黃曲霉B1含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中黃曲霉B1的殘留量

2 技術(shù)指標(biāo)

2.1 試劑盒靈敏度:0.03ppb(ng/ml)

2.2 反應(yīng)模式:25℃,30min~15min

2.3 檢測下限:

谷物……………………………………0.15ppb

食用油、花生…………………………0.6ppb

醬類、麥類、調(diào)料……………………0.3ppb

啤酒……………………………………0.3ppb

葡萄酒、醬油、醋……………………0.15ppb

2.4 交叉反應(yīng)率:

黃曲霉B1…………………………100%

 2.5 樣本回收率:

谷物…………………………………85%±15%

花生…………………………………82±15%

食用油………………………………85±15%

醬類、麥類…………………………83±15%

啤酒…………………………………84±15%

葡萄酒、醬油、醋………………87±15%

3 試劑盒組成

酶標(biāo)板……………………………96孔

標(biāo)準(zhǔn)液(黑蓋):各1ml

0ppb、0.03ppb、0.06ppb、0.12ppb、0.24ppb、0.48ppb

高標(biāo)準(zhǔn)液:100ppb …………………1ml

酶標(biāo)記物(紅蓋) …………………5.5ml

抗體工作液(藍(lán)蓋) ………………5.5ml

底物液A(白蓋)……………………6ml

底物液B(黑蓋)……………………6ml

終止液(黃蓋)………………………6ml

20×濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml

說明書 ………………………………1份

蓋板膜…………………………………1張

自封袋…………………………………1個

4 需要的器材和試劑

4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機、均質(zhì)器 、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)

4.2 微量移液器:單道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl

4.3 試劑:甲醇、正己烷、三氯甲烷或二氯甲烷

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知:

實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實驗結(jié)果。

5.2 配液:

配液1:樣品提取液

70%甲醇,即V甲醇:V去離子水=7:3。

配液2:工作洗滌液

將濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水)。

5.3 樣本前處理步驟:

5.3.1 谷物處理方法

1)稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中,加5ml樣品提取液,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;

2)取0.5ml上清,加入0.5ml去離子水,混勻;

3)取50μl進行分析。

    樣本稀釋倍數(shù):5    檢測下限:0.15ppb

5.3.2 玉米皮、麥麩等吸水性強的樣本處理方法

1)稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中,加20ml樣品提取液,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;

2)取0.5ml上清,加入0.5ml去離子水,混勻;(對于毒素含量*的樣本可用35%的甲醇稀釋后再測。比如取2)中的混合液0.1ml加35%的甲醇0.9ml混勻,終樣本稀釋倍數(shù)為200,檢測下限為6ppb。)

3)取50μl進行分析。

樣本稀釋倍數(shù):20    檢測下限:0.6ppb

注:由于毒素在樣本中的分布呈非均勻狀態(tài),取樣時需多點取樣充分混勻后再取2g進行試驗。

5.3.3 食用油、花生油處理方法

1)稱取2ml樣品于50ml離心管中,加8ml正己烷和10ml樣品提取液,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;

2)去除上層液體,取0.5ml下層液體加入0.5ml去離子水,混勻,再取混勻液體0.5ml加入0.5ml 35%甲醇,振蕩30S;

3)取50μl進行分析。

    樣本稀釋倍數(shù):20    檢測下限:0.6ppb

5.3.4 醬類、麥類、餅干、糕點等食品或調(diào)料處理方法

1)稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中,加10ml樣品提取液,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;

2)取2ml上清,加入4ml三氯甲烷(或二氯甲烷),振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;

3)轉(zhuǎn)移上層液體到另一容器中,下層液留置備用,向上層液中再加入4ml三氯甲烷(或二氯甲烷),充分振蕩混5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;

4)去除上層液體,合并兩次的下層液體并充分混勻;

5)取合并后的下層液體2ml于50-60℃氮氣下吹干;

6)加入0.5ml樣品提取液充分溶解干燥物,再加入0.5ml去離子水混勻;

7)取50μl進行分析。

    樣本稀釋倍數(shù):10    檢測下限:0.3ppb

5.3.5 啤酒處理方法

1)將啤酒充分?jǐn)嚢瑁ㄈコ鼵O2),取2ml啤酒樣品,加入1ml蒸餾水,再加入7ml甲醇,振蕩5分鐘;

2)取混勻后的樣品液0.5ml加入0.5ml去離子水,混勻;

3)取50μl進行分析。

    樣本稀釋倍數(shù):10    檢測下限:0.3ppb

5.3.6 葡萄酒、醬油、醋處理方法

1)取2ml樣品,加入2ml蒸餾水,再加入10ml三氯甲烷(或二氯甲烷),振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;

2)取下層液體1ml于50-60℃氮氣下吹干;

3)加入0.5ml樣品提取液充分溶解干燥物,再加入0.5ml去離子水,混勻;

5)取50μl進行分析。

樣本稀釋倍數(shù):5    檢測下限:0.15ppb

6 酶聯(lián)免疫試驗步驟

    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。

6.1 編    號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)30分鐘。

6.3 洗    滌:小心揭開蓋板膜,甩去孔內(nèi)液體,每孔加350ul工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,后一次拍干(用吸水紙拍干,拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

6.4 顯    色:每孔加入底物液A 50µl,再加底物液B 50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘(若藍(lán)色過淺,可適當(dāng)延長反應(yīng)時間)。

6.5 終    止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。

6.6 測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。

7 結(jié)果分析

7.1 百分吸光率的計算

    標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即

 百分吸光度值(%)=

A

×100%

A0

A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算

    以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度。

    若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

8 注意事項

8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。

8.3 混合要均勻,洗板要*,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性。

8.4 在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。

8.5 不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位(A450nm< 0.5 )時,表示試劑可能變質(zhì)。

8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。

9黃曲霉B1檢測試劑盒(ELISA方法) 貯藏及保存期

儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。

保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

牛D-乳酸(D-LA)ELISA試劑盒
牛晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)ELISA試劑盒
牛轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)ELISA試劑盒
牛前白蛋白(PA)ELISA試劑盒
牛腫瘤壞死因子γ(TNF-γ)ELISA試劑盒
牛層粘連蛋白(LN)ELISA試劑盒
牛CD63分子(CD63)ELISA試劑盒
牛多殺性巴氏桿菌抗原B2(PM-B2)ELISA試劑盒
牛T2毒素(T-2toxin)ELISA試劑盒
牛玉米赤霉烯酮(ZEN)ELISA試劑盒
牛黃曲霉(AFT)ELISA試劑盒

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