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產(chǎn)品名稱:

伏馬毒素快速檢測(cè)試劑盒(ELISA法)

產(chǎn)品型號(hào): 產(chǎn)品時(shí)間: 2023-03-08
伏馬毒素快速檢測(cè)試劑盒(ELISA法)由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的伏馬毒素B1和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗伏馬毒素B1抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含伏馬毒素B1含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較乘以樣本稀釋倍數(shù)即可得出樣本中伏馬毒素B1的殘留量。

產(chǎn)品概述

伏馬毒素快速檢測(cè)試劑盒(ELISA法)

使用說明書

(酶聯(lián)免疫法)

 

 1 原理及用途

伏馬毒素(Fumonisins)是由串珠鐮刀菌產(chǎn)生的真菌毒素,目前已知有28種衍生物,其中以伏馬毒素B1FB1)為普遍,研究也為深入,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)玉米及其制品,如動(dòng)物飼料均易被FB1造成污染。FB1毒性在伏馬毒素,對(duì)多種動(dòng)物有較嚴(yán)重的毒理作用。研究表明FB1可引發(fā)馬的白腦軟化癥,豬的肺水腫綜合癥,此外,還可誘發(fā)人類的食道癌和肝癌、胃癌等疾病,對(duì)畜牧業(yè)和人類的健康構(gòu)成危害。

試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的伏馬毒素B1和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗伏馬毒素B1抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含伏馬毒素B1含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較乘以樣本稀釋倍數(shù)即可得出樣本中伏馬毒素B1的殘留量。

2 技術(shù)指標(biāo)

2.1 試劑盒靈敏度:0.5ppb(ng/ml)

2.2 反應(yīng)模式:25℃,30min~15min

2.3 檢測(cè)下限:

玉米、飼料…………………………50ppb

食用油………………………………10ppb

2.4 交叉反應(yīng)率:

伏馬毒素B1…………………………100%

 2.5 樣本回收率:

飼料…………………………………95±15%

玉米…………………………………100±15%

食用油………………………………85±15%

 

3 試劑盒組成

酶標(biāo)板…………………………………96孔

標(biāo)準(zhǔn)液(黑蓋):各1ml

0ppb、0.5ppb、1.5 ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb

酶標(biāo)記物(紅蓋)……………………5.5ml

抗體工作液(藍(lán)蓋)…………………5.5ml

底物液A(白蓋)……………………6ml

底物液B(黑蓋)……………………6ml

終止液(黃蓋)………………………6ml

10×濃縮復(fù)溶液(黃蓋)……………50ml

20×濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml

說明書…………………………………1份

4 需要的器材和試劑

4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)

4.2 微量移液器:?jiǎn)蔚?0µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl

4.3 試劑:甲醇

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知:

實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

5.2 配液:

配液1:樣本提取液

70%甲醇,即V甲醇:V去離子水=7:3。

配液2:復(fù)溶液

10×濃縮復(fù)溶液用去離子水10倍稀釋(1份10×濃縮復(fù)溶液加9份去離子水),復(fù)溶液在4環(huán)境可保存一個(gè)月。

配液3:1×工作洗滌液

濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水)。

5.3 樣本前處理步驟:

5.3.1 玉米、飼料處理方法

1)稱取1g粉碎樣品于50ml離心管中,加5ml樣品提取液,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;

2)取上清0.1ml,加入1.9ml復(fù)溶液,振蕩2分鐘;

3)取50μl進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù):100   檢測(cè)下限:50ppb

(若樣本中伏馬毒素B1的含量較高,可在步驟2)按比例增大稀釋倍數(shù),檢測(cè)出的含量乘以樣本實(shí)際的稀釋倍數(shù)即為樣本中的含量)

5.3.2 食用油處理方法

1)稱取5ml樣品于50ml離心管中,加8ml正己烷和5ml樣品提取液,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;

2)去除上層液體,取100ul下層液體加入1.9ml復(fù)溶液,混勻;

3)取50μl進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù):20      檢測(cè)下限:10ppb

6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟

    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。

6.1 編    號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)30分鐘。

6.3 洗    滌:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液350µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

6.4 顯    色:每孔加入底物液A 50µl,再加底物液B 50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘若藍(lán)色過淺,可適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間

6.5 終    止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。

6.6 測(cè)吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm)。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。

7 結(jié)果分析

7.1 百分吸光率的計(jì)算

    標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即

 百分吸光度值(%)=

A

×100%

A0

A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

    以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。

    若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

8 注意事項(xiàng)

8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

8.3 混合要均勻,洗板要*,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性。

8.4 在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。

8.5 不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。

8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm< 0.5 )時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。

8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。

         

9 伏馬毒素快速檢測(cè)試劑盒(ELISA法)貯藏及保存期

儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。

保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

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