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產(chǎn)品名稱:

**色葡萄球菌(SA)核酸檢測試劑盒

產(chǎn)品型號: 熒光PCR法 產(chǎn)品時間: 2024-10-22
【產(chǎn)品名稱】
商品名稱:**色葡萄球菌(SA)核酸檢測試劑盒
Name :Staphylococcus aureus (SA) nucleic acid detection kit (PCR- fluorescence probe method)
【包裝規(guī)格】50T/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒適用于檢測標(biāo)本中指標(biāo)的定量檢測,輔助診斷。

產(chǎn)品概述

【產(chǎn)品名稱】

商品名稱:**色葡萄球菌(SA)核酸檢測試劑盒

Name :Staphylococcus aureus (SA) nucleic acid detection kit (PCR- fluorescence probe method)

【包裝規(guī)格】50T/盒

**色葡萄球菌(SA)核酸檢測試劑盒【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測標(biāo)本中指標(biāo)的定量檢測,輔助診斷。

【試劑組成】

名 稱

規(guī) 格

酶液

50μL×1 管

反應(yīng)液

1.0mL×1 管

陽性質(zhì)控品

50μL ×1 管

陰性質(zhì)控品

250μL ×1 管

詳見說明書

注:

1) 不同批號試劑不能混用。

2) 試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標(biāo)示的檢測次數(shù)。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒對指標(biāo)特異核酸序列設(shè)計(jì)引物和探針,用一步法熒光RT-PCR 技術(shù)對指標(biāo) RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測,用于對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【使用方法】

1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1 樣本前處理

【標(biāo)本采集】

拭子:應(yīng)使用與用采樣拭子,適度拭抹咽后壁和兩側(cè)扁桃體部位,應(yīng)避免觸及舌 部 ; 迅 速 將 拭 子 放 入 標(biāo) 本 采 集 管 中 , 旋 緊 管 蓋 并 密 封 , 以 防 干 燥 。

全血:疑似感染的血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管,8000rpm 離心 2min,取適量上清液于 1.5mL 滅菌離心管中。痰: 以清晨的第一口痰為宜。先用清水漱口,囑患者用力咳出深部的痰于無菌樣本保存管,密封,即可送檢。

【標(biāo)本采集】

病死或撲殺禽,取喉氣管、腦、胸肌、心肌和肺等組織;待檢活禽,用棉拭子取分泌物或排泄物,置于 1mL 50%甘油生理鹽水中。

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但丌能超過 6 個月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

1.2DNA 提取

1) 對上述處理好的標(biāo)本加入 50μL 核酸提取液,100℃恒溫處理 10min,13,000rpm 離心 5min,取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管,-20℃保存;

2) DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的 DNA 提取試劑*(離心柱提取法),請嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.2 RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA 提取試劑*(離心柱提取法,請按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑

反應(yīng)液

酶液

用量

20μL

1μL

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,21uL/管。

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL;熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,選擇 None 即可。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

步驟

循環(huán)數(shù)

溫度

時間

收集熒光信號

1

1 cycle

42℃

20min

2

1 cycle

95℃

10min

3

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec

5. 結(jié)果分析判定

5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、

stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。

5.2 結(jié)果判斷

陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且有明顯的擴(kuò)增曲線。

可疑:檢測通道 Ct 值>35.0,且出現(xiàn)明顯曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn),重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果如果同樣出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和明顯擴(kuò)增曲線則為陽性,否則為陰性。

陰性:樣本檢測結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴(kuò)增曲線。

6. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品:無明顯擴(kuò)增曲線且無 Ct 值顯示;

陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

7. 檢測方法的局限性

① 樣本檢測結(jié)果不樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);

②樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

③陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會導(dǎo)致假陽性結(jié)果;

④病原體在流行過程中基因突變、重組,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

⑤不同的提取方法存在提取效率差異,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

⑥試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果;

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次,有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標(biāo)本采集】

病死或撲殺動物,取水泡皮及水泡液;待檢活動物,取 O/P 液 2~3mL。

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【產(chǎn)品圖片】

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【生產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱:上海晅科生物科技有限公司

上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的熒光PCR檢測試劑盒質(zhì)量高,價格低,售后有保證。為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。

請直接向我司客服索取說明書

本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷。



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